脂肪酸合成酶（FAS）活性試劑盒說明書 技術文章

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脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthase，FAS）活性試劑盒

商品貨號：QS1108
英文名稱：Fatty Acid Synthase (FAS) Assay Kit
別名：脂肪酸合成酶試劑盒 FAS Kit 脂肪酸合成酶（FAS）試劑盒 脂肪酸合成酶（FAS）測試盒
檢測方法：常量法

• 產品詳細介紹

測定意義：

FAS是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。

測定原理：

FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+沒有；通過測定340nm 光吸收下降速率，計算FAS活性。

• 產品說明書

貨號：QS1108-50                       規格：50 管/48 樣

脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性試劑盒說明書 紫外分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

FAS 是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍 表達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。

測定原理：

FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成長鏈脂肪酸和 NADP+；NADPH 在 340nm 有吸收 峰，而 NADP+沒有；通過測定 340nm 光吸收下降速率，計算 FAS 活性。

自備實驗用品及儀器：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 50mL×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 支。臨用前加入 1100 μ L 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加入 1100 μ L

試劑四，充分溶解，用不完的 試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑四：液體 50mL×1 瓶, 4℃保存。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 2100μ L 試劑四，充分溶解，用不完的試劑 分裝后-20℃避光保存，禁止反復凍融。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 40min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時 間 3min）；然后 12000g，4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

FAS 測定操作：

1. 分光光度計預熱 30min，調節波長到 340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑四置于 40℃水浴中預熱 30 min。

3. 測定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μ L 上清液、20μ L 試劑二、20μ L 試劑三、820μ L 試劑四和 40μ L 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值，分 別記錄為 A1 和 A2。△A 測=A1-A2。

FAS 活性計算公式：

（1）按照蛋白濃度計算 活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ) ÷(Cpr×V 樣)÷T =1608×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =1608×△A ÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每 10⁴個細胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/10⁴ cell) = (△A÷ε ÷d×V 反總×109 ) ÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T =1608×△A ÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ) ÷V 樣÷T =1608×△A

ε ：NADPH 摩爾消光系數，6.22×10³ /mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應體系總體 積，1000μ L=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V 樣：加入反應 體系中上清液體積，100μ L=0.1 mL；T：反應時間，1min。

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