一氧化氮（NO）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 技術(shù)文章

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一氧化氮（Nitric Oxide，NO）含量檢測(cè)試劑盒

商品貨號(hào)：MS1804
英文名稱：Nitric oxide Assay Kit
別名：一氧化氮含量檢測(cè)試劑盒
檢測(cè)方法：微量法

• 產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測(cè)定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過(guò)程中起著重要的作用。

測(cè)定原理：

NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成 NO2-，在酸性條件下，NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算NO含量。為了排除樣品色素等的影響，每個(gè)樣品需做對(duì)照管。

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• 產(chǎn)品說(shuō)明書
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貨號(hào)：QS1804                        規(guī)格：50 管/24 樣

一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 可見分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng) 中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用，是 一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過(guò)程中起著重要的作用。

測(cè)定原理：

NO 在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成 NO₂^-，在酸性條件下，NO₂^-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化 合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在 550nm 處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì) 算 NO 含量。為了排除樣品色素等的影響，每個(gè)樣品需做對(duì)照管。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 6mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 12mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

1. 組織：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：

按照細(xì)胞數(shù)量（10^4個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí) 間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 15min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟和操作表

           對(duì)照管        測(cè)定管

樣品（μ L）     400         400

試劑一（μ L）              250

試劑二（μ L）   250

試劑三（μ L）   250         250

混勻，4℃靜置 15min，以對(duì)照管調(diào)零，1mL 玻璃比色皿，測(cè)定 A₅₅₀。

NO 含量計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R² = 0. 9986

1、組織樣品：

NO 含量定義：25℃時(shí)，每克樣品或每毫克蛋白 15min 生成 1μ moL NO₂ ^-，相當(dāng)于 1μ moL NO。 （1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

NO 含量（μ moL/g）=（A₅₅₀ +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×10^-3 = 0.14×（A₅₅₀ +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO 含量（μ moL/mg prot）=（A₅₅₀ +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣×Cpr）×10^-3 = 0.14×（A₅₅₀ +0.0103）÷Cpr

2、其他樣品：

NO 含量定義：25℃時(shí)，每升樣品 15min 生成 1μ moL NO₂^-，相當(dāng)于 1μ moL NO。

NO 含量（μ moL/L）=（A₅₅₀ +0.0103）÷0.016×V 反總÷V 樣 = 140×（A₅₅₀ +0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.9mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.4mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL； W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒 2-8℃保存。

2. 盡量使用新鮮樣品進(jìn)行檢測(cè)，試劑三有腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施。

3. 若檢測(cè)出得 OD 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外，請(qǐng)將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋，并在計(jì)算公式中除 以濃縮倍數(shù)或者乘以稀釋倍數(shù)。

4. 低檢出限為 0.65μ moL/L。

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